若目的條帶未出現，或很淡，可試用以下方法增強發光強度：

1．用清水漂洗膜數分鐘，重加發光液進行曝光，可延長曝光時間；

2．將膜在 PBST 或 TTBS 中洗滌 30 min 或更長，期間**少換 2 次液；

3．封閉 40~60 min；

4．一抗雜交，室溫 1 h。37℃ 1 h 會更強，但可能增加非特異條帶；

5．PBST 或 TTBS 洗膜 20 min，期間換 2 次液；

6．二抗雜交，37℃ 1 h；

7．PBST 或 TTBS 洗膜 20 min，期間換 2 次液；

8．發光鑒定；

9．若條帶仍未出現或很淡，可以再用 PBST 或 TTBS 洗滌膜 20 min，期間換 2 次液；

10．三抗雜交，室溫 1 h。37℃ 1 h 會更強，但可能增加非特異條帶。三抗即抗二抗的二抗，比如二抗用羊抗兔，此時三抗可以選擇兔抗羊或鼠抗羊等；

11．PBST 或 TTBS 洗滌膜 20 min，期間換 2 次液；

12．發光鑒定。

注：一抗溶液中加入0.2% 疊氮鈉后，可4℃存放**少 2 周，存放一個月我也用過，沒問題，再長時間還沒試過。