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工作原理:西方印跡的新方法

問題:生命科學研究的支柱,蛋白質印跡通常用于評估相對蛋白質表達差異,例如當調查細胞信號傳導途徑時。精確的量化需要仔細注意程序細節和歸一化。傳統上,western印跡是兩天的過程,具有許多步驟:電泳,轉移,阻斷,初次和二次抗體應用和檢測。優化通常是具有挑戰性的,因為當印跡失敗時,很難確定它是導致抗體結合和檢測的步驟的結果,還是該問題是否是由于抗體本身。

解決方案:一個可以幫助的系統是來自Bio-Rad Laboratories,Inc。的V3 Western Workflow TM,其使用無污染技術來確認蛋白質分離和轉移如預期進行,隨后的免疫檢測將產生高質量的western印跡數據。這種新系統將工作流程時間減半,而無污染技術確保更快,更準確地定量蛋白質表達水平。

V3 Western Workflow將Bio-Rad的TGX Stain- Free™預制凝膠,TransBlot®Turbo™傳輸系統和ChemiDoc™MP成像系統集成為一個集成解決方案。

這樣的系統通過電泳和轉移步驟可以節省大量的時間。例如,TGX無染料凝膠上的運行時間為15分鐘,而傳統迷你凝膠的運行時間為45分鐘。同時,Trans-Blot Turbo在7分鐘內實現了蛋白質轉移,相比之下,傳統油罐方法的轉化時間為1小時或過夜。轉印效率可比。

凝膠中嵌入的無污染技術通過允許容易的質量控制為蛋白印跡過程增加信心。使用ChemiDoc MP成像系統和TGX無染料凝膠,研究人員可以在一分鐘內可視化電泳后凝膠結果,以確保樣品不會降解。這代表了比傳統的考馬斯凝膠染色方法顯著的進步,其可能需要長達兩個小時來完成,并且不是免疫印跡相容的。ChemiDoc MP還允許研究人員在印跡檢測前檢查膜,并立即可視化蛋白轉移。凝膠隨后可以重新成像以確定是否有任何蛋白質殘留。

重要的是,無染色成像使總蛋白標準化更準確的定量。總蛋白標準化已顯示比常規管家蛋白更一致,其在某些實驗條件或樣品類型下可變地進行。因此,無污漬技術可以通過消除管家蛋白檢測所必需的連續探測或剝離和重復步驟來減少四小時western印跡標準化過程

雖然更快的進程通常會以數據質量為代價,像V3 Western Workflow這樣的系統可以提供更快的結果,同時提高這些結果有效的信心。


V3 Western工作流程由五個步驟組成,每個步驟由Bio-Rad的印跡儀器和/或產品系列實現:

1.蛋白分離:Bio-Rad的Criterion™和Mini-PROTEAN®TGX無色™預制凝膠

2.可視化蛋白質:ChemiDoc™MP成像系統

3.轉移蛋白:TransBlot®Turbo™轉移系統

4.驗證傳輸:ChemiDoc MP成像系統

5.驗證蛋白質印跡:ChemiDoc MP成像系統

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