(一)蛋白質(zhì)電泳
1.請參照常規(guī)電泳操作.
2.分子量標(biāo)準(zhǔn):
可選擇普通分子量標(biāo)準(zhǔn)或預(yù)染的分子量標(biāo)準(zhǔn).在選擇預(yù)染的分子量標(biāo)準(zhǔn)時(shí),要注意其優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn):
優(yōu)點(diǎn): 在電泳過程中可監(jiān)控蛋白質(zhì)分離狀態(tài); 可指示轉(zhuǎn)印中蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)印效率.
缺點(diǎn): 染料影響蛋白質(zhì)移動(dòng)速度;分子量測定略欠精確;影響蛋白質(zhì)與膜的結(jié)合力.
購買信息:
|
中范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(14.3-97.4KD)
|
V5235S
|
200μg
|
國產(chǎn)
|
80元
|
|
分子量大小:（14.3、21.5、31、40、42.7、55、66.2、97.4KD）
|
||||
|
中范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(24-97KD)
|
MTB087-1
|
20次
|
國產(chǎn)
|
80元
|
|
分子量大小:（24、36、53、66、97KD）
|
||||
|
低范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（6.5-66KD）
|
M3913-1
|
20次
|
Sigma
|
280元
|
|
低范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（6.5-66KD）
|
M3913-1
|
5×20次
|
Sigma
|
1198元
|
|
分子量大小:（6.5、20、24、29、36、45、66KD）
|
||||
|
高范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（36-205KD)
|
M3788-1
|
20次
|
Sigma
|
280元
|
|
高范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（36-205KD)
|
M3788-1
|
5×20次
|
Sigma
|
1198元
|
|
分子量大小:（36、45、55、66、84、97、116、205KD）
|
||||
|
寬范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（6.5-205KD)
|
M4038-1
|
20次
|
Sigma
|
280元
|
|
寬范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)（6.5-205KD)
|
M4038-1
|
5×20次
|
Sigma
|
1266元
|
|
分子量大小:（6.5、14.2、20、24、29、36、45、55、66KD）
|
||||
|
預(yù)染的低范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(18-80KD)
|
|
20次
|
自產(chǎn)
|
320元
|
|
預(yù)染的低范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(18-80KD)
|
|
50次
|
自產(chǎn)
|
680元
|
|
分子量大小: 80, 60, 39, 23, 18 kDa
|
||||
|
預(yù)染的中高范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(20-210KD)
|
|
20次
|
自產(chǎn)
|
320元
|
|
預(yù)染的中高范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(20-210KD)
|
|
50次
|
自產(chǎn)
|
680元
|
|
分子量大小:210, 140, 106/102, 80, 52, 20 kDa
|
||||
|
預(yù)染的中高范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(18.3-210KD)
|
26681
|
48次
|
Pierce
|
1214元
|
a)膜的選擇:主要采用 NC膜和PVDF膜,其比較如下:
|
NC膜
|
PVDF膜
|
|
|
物理強(qiáng)度
|
差
|
好
|
|
蛋白質(zhì)結(jié)合能力
|
80-100ug/cm2
|
100-200ug/cm2
|
|
溶劑耐受力
|
無
|
有
|
|
考馬斯亮蘭染色
|
否
|
可以
|
|
ECL檢測
|
稍差
|
可以
|
|
快速免疫檢測
|
否
|
可以
|
|
SDS存在下蛋白質(zhì)結(jié)合
|
差
|
好
|
|
質(zhì)譜分析
|
否
|
可以
|
b)膜的大小: 請根據(jù)膠的面積來確定.
c)膜的孔徑: 0.45μm適用一般蛋白質(zhì).0.2μm適用小分子蛋白質(zhì).
購買信息:
|
66485
|
硝酸纖維素膜,0.45um,30cmX3m/卷
|
美國Gelman
|
1395元/卷
|
|
硝酸纖維素膜,0.45um,20cmX20cm
|
美國Gelman
|
80元/張
|
|
|
硝酸纖維素膜,0.45um,20cmX20cm
|
國產(chǎn)
|
30元/張
|
|
|
60207
|
尼龍膜, 0.45um,30cmX3m/卷
|
美國Gelman
|
2310元/卷
|
|
尼龍膜, 0.45um,20cmX15cm
|
美國Gelman
|
90元/張
|
|
|
尼龍膜, 0.45um,直徑100mm,50張/盒
|
國產(chǎn)
|
260元/盒
|
|
|
66543
|
PVDF膜, 0.45um,30cmX3m/卷
|
美國Gelman
|
1690元/卷
|
|
PVDF膜, 0.45um, 直徑100mm,50張/盒
|
國產(chǎn)
|
260元/盒
|
蛋白質(zhì)染色的染料有很多種,各種的特點(diǎn)均不一樣.
|
蛋白質(zhì)靈敏度
|
影響免疫檢測
|
|
|
Ponceau-S Red麗春紅
|
5ug
|
無
|
|
快綠Fc
|
5ug
|
無
|
|
Sypro Rose
|
1-2ng
|
無
|
|
氨基黑10B
|
1ug
|
有
|
|
考馬斯亮蘭R-250
|
500ng
|
有
|
|
印度墨
|
100ng
|
有
|
|
膠體金
|
4ng
|
有
|
|
Ponceau-S Red麗春紅
|
Sigma原裝
|
10g
|
182元
|
|
快綠Fc
|
Amresco分裝
|
25g
|
258元
|
|
氨基黑10B
|
Sigma分裝
|
10g
|
168元
|
|
考馬斯亮蘭R-250
|
Amresco分裝
|
10g
|
168元
|
|
蛋白銀染試劑盒
|
自產(chǎn)MTB083-1
|
10次
|
188元
|
|
SDS-PAGE蛋白快速染色試劑
|
自產(chǎn)
|
25次
|
100元
|
|
Western Blot 膜可逆染色劑
|
自產(chǎn)
|
100ml
|
100元
|
有各種不同的免疫檢測方法.請注意選擇.方法不同,則所需的試劑也不同.如需方便,可選擇完整的試劑盒.
A.封閉膜:
這一步會(huì)影響結(jié)果的成敗和背景的強(qiáng)度.常用封閉劑為BSA和Tween20.脫脂干奶粉不適合用于糖蛋白和生物素標(biāo)記抗體.
購買信息:
|
牛血清白蛋白組份五BSA
|
Amresco分裝
|
25g
|
280元
|
|
Tween 20
|
Amresco分裝
|
500ml
|
150元
|
|
Western Blot 膜封閉劑
|
自產(chǎn)
|
100ml
|
100元
|
B.一抗: 根據(jù)目的蛋白質(zhì)選擇.單抗或多抗均可.注意已變性蛋白質(zhì)無法檢測,必須采用非變性膠電泳.我司有 R&D,Genex,Santa Cruz等公司的原裝抗體或進(jìn)口分裝抗體.具體請參見免疫學(xué)部分產(chǎn)品----**抗體.
C.標(biāo)記二抗: 根據(jù)一抗的來源選擇二抗.
購買信息: 請參見免疫學(xué)部分試劑---各種標(biāo)記抗體
D.底物系統(tǒng): 采用常規(guī)底物或化學(xué)發(fā)光底物.
(1)顯色法: 常用底物為BCIP/NBT或DAB .此法簡單,但靈敏度不高,并難以從膜上去除.
(2)化學(xué)發(fā)光法: 目前比較常用的方法.靈敏度較高,檢測時(shí)可采用X光膠片或CCD成像系統(tǒng).
不同顯色方法產(chǎn)品比較如下:
|
廠家
|
靈敏度
|
方法
|
|
|
SuperSignalâ West Pico 化學(xué)發(fā)光底物
|
美國Pierce
|
皮克級(jí)
|
化學(xué)發(fā)光法
|
|
SuperSignalâ West Dura 持久性化學(xué)發(fā)光底物
|
美國Pierce
|
低飛克級(jí)
|
化學(xué)發(fā)光法
|
|
SuperSignalâ West Femto 高靈敏度化學(xué)發(fā)光底物
|
美國Pierce
|
飛克級(jí)
|
化學(xué)發(fā)光法
|
|
ECL Kit
|
Amersham
|
飛克級(jí)
|
化學(xué)發(fā)光法
|
|
BCIP/NBT (AP酶)
|
100pg
|
顯色法
|
|
|
DAB (HRP酶)
|
100pg
|
顯色法
|
SuperECL Plus Western Blotting 超敏發(fā)光液
采用獨(dú)特的發(fā)光底物系統(tǒng)，是世界上**靈敏的ECL Western Blot 化學(xué)發(fā)光試劑。用于Western Blotting 條帶的熒光發(fā)光，檢測直接或間接標(biāo)記辣根過氧化物酶HRP 的抗體及其關(guān)聯(lián)的抗原。由兩種溶液組成，使用前混合。SuperECL Plus 超敏發(fā)光液，價(jià)格低廉，靈敏度大大高出Amersham 和Santa Cruz 公司同類ECL 產(chǎn)品100 倍以上，也明顯高出Pierce 的SuperSignal West Pico 化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)數(shù)倍，但背景更干凈，發(fā)光時(shí)間持久，可以長達(dá)10 小時(shí)以上。
特別適用于豐度極低而一般ECL 系統(tǒng)難于檢測的目的蛋白。
特點(diǎn)如下：
ж 靈敏度極高，可檢測10-100 fg 抗原。
ж 高信噪比，背境干凈。
ж 發(fā)光迅速。
ж 發(fā)光持續(xù)12小時(shí)以上。
ж 可在日光燈下進(jìn)行發(fā)光操作。
ж 節(jié)省抗體(一抗1:2000－1:6000；二抗1:4000－1:10000)。
ж 儲(chǔ)存條件：4℃避光儲(chǔ)存一年，偶爾室溫放置數(shù)周不影響質(zhì)量。
購買信息
|
產(chǎn)品名稱
|
規(guī)格
|
編號(hào)
|
價(jià)格
|
|
SuperECL Plus Western Blotting 超敏發(fā)光液
|
10ml
|
P1010-10
|
138
|
|
25ml
|
P1010-25
|
266
|
|
|
100ml
|
P1010-100
|
880
|
美國Pierce公司化 學(xué) 發(fā) 光 底 物 系 列
|
SuperSignalâ 底物家族提供一系列的底物，適合免疫印跡的多種靈敏度要求。
|
||||||||||||||||||||||||||||||||
|
||||||||||||||||||||||||||||||||
|
SuperSignal@ West Pico 化學(xué)發(fā)光底物
|
||||||||||||||||||||||||||||||||
|
特征
優(yōu)點(diǎn)
|
經(jīng)濟(jì)：比任何其它化學(xué)發(fā)光底物產(chǎn)品花費(fèi)更少。
更長發(fā)光時(shí)間：強(qiáng)光發(fā)射超過一個(gè)工作日，獲得你想要曝光次數(shù)。
高強(qiáng)度：信號(hào)比其它基于發(fā)光胺的系統(tǒng)強(qiáng)兩倍。
皮克級(jí)靈敏性：高度靈敏性可快速顯色較寬水平范圍內(nèi)的蛋白質(zhì)。
優(yōu)良的穩(wěn)定性：24小時(shí)工作溶液穩(wěn)定性；在運(yùn)輸條件環(huán)境下**少可穩(wěn)定1年。
|
|||||||||||||||||||||||||||||||
|
SuperSignal@ West Dura 持久性化學(xué)發(fā)光底物
|
||||||||||||||||||||||||||||||||
|
特征
優(yōu)點(diǎn)
|
24小時(shí)發(fā)光時(shí)間：比任何其它改良的HRP化學(xué)發(fā)光底物提供的要長10倍；為發(fā)表質(zhì)量的印跡提供更多的曝光
極好的靈敏度：具**的10-15 克級(jí)靈敏度
節(jié)省抗體：使用Super Signal â West Dura 伸展持續(xù)期底物比用其它化學(xué)發(fā)光底物，抗體稀釋度可高得多。
立即產(chǎn)生強(qiáng)烈信號(hào)，易被膠片或化學(xué)發(fā)光檢測系統(tǒng)檢測
工作濃度**少穩(wěn)定24小時(shí)；試劑盒在運(yùn)輸條件下可穩(wěn)定**少一年
|
|||||||||||||||||||||||||||||||
|
SuperSignal@ West Femto **高靈敏度化學(xué)發(fā)光底物
|
||||||||||||||||||||||||||||||||
|
特征
優(yōu)點(diǎn)
|
釋放由化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)產(chǎn)生的**強(qiáng)信號(hào)；使膠片或圖象儀系統(tǒng)成像更容易達(dá)到可能檢測蛋白質(zhì)的**低限：10-15 克
經(jīng)濟(jì)：使寶貴的一抗稀釋度可達(dá)1/100,000
|
|||||||||||||||||||||||||||||||
|
Lumi-PhosTM West Blotting 化學(xué)發(fā)光底物
|
||||||||||||||||||||||||||||||||
|
PIERCE 基于堿性磷酸酶檢測系統(tǒng)的化學(xué)發(fā)光底物，其同時(shí)具有兩個(gè)特色：高強(qiáng)度信號(hào)和較低的背景。
|
||||||||||||||||||||||||||||||||
定貨信息
|
目錄號(hào)
|
產(chǎn)品名稱
|
包裝
|
價(jià)格
|
|
SuperSignalâ West Pico化學(xué)發(fā)光底物
|
|||
|
34080
|
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate
|
500ml
|
2178
|
|
34077
|
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate
|
100ml
|
647
|
|
34079
|
SuperSignalâ West Pico Chemiluminescent Substrate Trial Kit
|
50ml
|
383
|
|
SuperSignalâ West Dura持久性化學(xué)發(fā)光底物
|
|||
|
34075
|
SuperSignal® West Dura Extended Duration Substrate
|
100ml
|
3643
|
|
37071
|
SuperSignal® West Dura Extended Duration Substrate Trial Kit
|
20ml
|
805
|
|
SuperSignalâ West Femto**高靈敏度化學(xué)發(fā)光底物
|
|||
|
34095
|
SuperSignal® West Femto Maximum Sensitivity Substrate
|
100ml
|
3828
|
|
34094
|
SuperSignal® West Femto Maximum Substrate Trial kit
|
20ml
|
950
|
4.Western Blotting檢測試劑盒
我們開發(fā)了此步免疫檢測的完整的試劑盒,即HRP標(biāo)記的二抗檢測系統(tǒng)(含封閉液,洗液,底物,HRP/親和素-二抗),您只需準(zhǔn)備好一抗,并選擇和一抗動(dòng)物來源相應(yīng)的試劑盒就可以.對于實(shí)驗(yàn)來說,采用完整的試劑盒可以避免各種試劑的不匹比而帶來的結(jié)果不理想.
Western Blotting DAB顯色法檢測試劑盒
試劑盒的內(nèi)容：
（1）封閉試劑：10g蛋白質(zhì)干粉2包。
（2）濃縮抗體稀釋液：20ml×2瓶，為10倍濃縮液。
（3）過氧化物酶標(biāo)記二抗。1ml。效價(jià)1：200―400
（4）DAB濃縮液10ml(×40倍)
購買信息:
|
Western Blotting DAB顯色kit（大鼠IgG）
|
SA2023
|
國產(chǎn)
|
盒
|
550元
|
|
Western Blotting DAB顯色kit（山羊IgG）
|
SA2021
|
國產(chǎn)
|
盒
|
550元
|
|
Western Blotting DAB顯色kit（兔IgG）
|
SA2022
|
國產(chǎn)
|
盒
|
550元
|
|
Western Blotting DAB顯色kit（小鼠IgG）
|
SA2020
|
國產(chǎn)
|
盒
|
550元
|
|
SuperSignal West Pico His蛋白Western檢測試劑盒
|
15168
|
Pierce
|
盒
|
3268元
|
|
CL-Xposure X 光膠片(5”x7”)
|
34090
|
Pierce
|
100張
|
1054元
|
|
CL-Xposure X 光膠片(8”x10”)
|
34091
|
Pierce
|
100張
|
2121元
|
|
柯達(dá)X 光膠片(5”x7”)
|
|
合資
|
100張
|
200元
|
